Современные методы патоморфологических исследований. Украинские патоморфологи

Самостоятельная работа № 1

Тема. Современные методы патоморфологических исследований. Украинские патоморфологи.

Понятие о морфологических методах

Особенностью морфологических методов исследования в биологии и медицине является использование эмпирической информации, полученной непосредственнопри изучении объекта. В отличие от этого, можно изучать свойства объекта, непосредственно не воспринимая его, а исходя из характера вторичных изменений в среде, вызванных самим существованием объекта (такие методы исследования широко используются в патологической физиологии и в клинической медицине). Другими словами, в основе морфологического метода лежит непосредственное восприятие изучаемого предмета, прежде всего его визуальная характеристика как результат наблюдения.

Морфологические методы, как и любые другие научные методы, реализуются в три этапа:

1. Эмпирический  этап — получение первичной информации об объекте от органов чувств. В патологической морфологии, помимо визуальной, большое значение имеет тактильная информация (при определении консистенции изменённой ткани).

2. Теоретический  этап — этап осмысления полученных эмпирических данных и их систематизации. Этот этап требует широкой эрудиции исследователя, поскольку эффективность восприятия эмпирической информации напрямую зависит от полноты теоретических знаний, что выражено в формуле: «Мы видим то, что знаем».

3. Этап практической  реализации — использование результатов исследования в практической деятельности. Результаты морфологического исследования в медицине являются основой диагноза, что и определяет важное практическое значение метода.

Дескриптивный метод

Среди морфологических методов на эмпирическом этапе особое значение имеет дескриптивный метод (метод описания) — метод фиксации воспринимаемой информации с использованием вербальных символов (средств языка как знаковой системы). Корректное описание патологических изменений является своеобразной информационной копией объекта исследования, поэтому оно должно быть как можно более полным и точным.

Метод описания макрообъектов применяется не только патологоанатомами и судебно-медицинскими экспертами, но и врачами многих клинических специальностей. Наиболее часто метод описания макрообъектов используется при обнаружении врачом во время осмотра больного изменений покровных тканей (кожи и видимых слизистых оболочек). При хирургических вмешательствах внешние изменения внутренних органов, прежде всего удаляемых, хирург отражает в протоколе операции.

Классификация морфологических методов

К основным морфологическим методам относятся:

1. Макроморфологический метод — метод изучения биологических структур без значительного увеличения объекта. Исследование при помощи лупы с небольшим увеличением также относится к макроморфологическому методу. Макроморфологический метод нецелесообразно называть «макроскопическим исследованием», так как получаемая информация является не только визуальной.

2. Микроморфологический (микроскопический) метод — метод морфологического исследования, который использует приборы (микроскопы), значительно увеличивающие изображение объекта. Предложено много вариантов микроскопического метода, однако наиболее широко используется световая микроскопия (свето-оптическое исследование), также в последние годы активно развивается система Иммуногистохими́ческих исследований для определения патологических процессов на молекулярном и генетическом уровне.

Макроморфологическое исследование

В патологической анатомии исследование и описание макрообъектов (тело умершего, органы или их фрагменты) является первым этапом морфологического анализааутопсийного и операционного материала, дополняемого затем микроскопическим и при необходимости молекулярно-биологическим исследованием.

Макроморфологические параметры. Описание патологических изменений в органах проводится с использованием следующих основных параметров:

1. Локализация патологического процесса в органе (при поражении не всего органа, а его части) или системе органов.

2. Величина органа, его фрагмента и его патологически изменённого участка (размерный параметр, объёмная характеристика).

3. Конфигурация (очертания, форма) патологически изменённого органа или его части.

4. Цветовая характеристика ткани с поверхности и на разрезе.

5. Консистенция патологически изменённой ткани.

6. Степень однородности патологически изменённой ткани по цвету и консистенции.

Если параметр не изменён, его обычно не отражают в описании объекта (для большей достаточности описательной части протокола исследования также описываются и не измененные основные органы ткани и системы).

7. Забор материала для  гистологического и прочих исследований, как внешне патологически измененных  органов и тканей так и внешне  нормальных органов и тканей (кстати, внешне нормальный вид органа и ткани не гарантирует нормального строения данной ткани на гистологическом уровне именно поэтому необходимо брать для исследования и внешне не измененные ткани).

Микроморфологический метод

Специфическим для патологоанатомической практики является исследование тканевых срезов. Тканевые срезы для обычного свето-оптического исследования готовят при помощи специальных приборов (микротомов) после предварительной подготовки — проводки, либо замораживания и окрашивают различными методами. Оптимальная толщина таких срезов 5—7 мкм (но может варьировать от метода и цели исследования от ультратонких 0,5-3 мкм до толстых в 20-40 мкм).Гистологический препарат представляет собой окрашенный тканевый срез, заключённый между предметным и покровным стёклами в прозрачной заключающей среды (бальзам, полистирол и т. п.).

Различают обзорные (общие) и специальные (дифференциальные) методы окраски. Специальными методами выявляются определённые тканевые структуры и компоненты, те или иные вещества (гистохимическое и иммуногистохимическое исследование).

Наиболее часто используется окраска тканевых срезов гематоксилином и эозином.

Гематоксилин — природный краситель, экстракт коры тропического кампешевого дерева — окрашивает в синий цвет ядра клеток («ядерный краситель»), отложения солей кальция, колонии грам-позитивных микроорганизмов и волокнистую ткань в состоянии мукоидного отёка. Гематоксилин является основным (щёлочным) красителем, поэтому свойство ткани воспринимать его называется базофилией (от лат. basis — основание).

Эозин — синтетическая розовая краска, краска цвета утренней зари (названа по имени древнегреческой богини зари Эос). Эозин относится к кислым красителям, поэтому свойство тканевых структур воспринимать его называется ацидофилией (лат. acidum — кислота), или оксифилией (греч. ὄξος — уксус, кислый напиток). Эозином окрашиваются цитоплазма большинства клеток («цитоплазматический краситель»), волокнистые структуры и не изменённое межклеточное вещество.

Широко распространены методы выявления в тканевых срезах волокнистых структур соединительной ткани, прежде всего коллагеновых волокон. В России традиционно предпочтение отдаётся методу Ван Гизона (Van Gieson); при этом ядра клеток, грам-позитивные микроорганизмы и депозиты кальция окрашиваютсяжелезным гематоксилином Вейгерта в чёрный цвет, коллагеновые волокна и гиалин — в красный цвет кислым фуксином, остальные структуры межклеточного вещества и цитоплазма клеток — в жёлтый цвет пикриновой кислотой. В странах Запада чаще используются так называемые трихромные (трёхцветные) методыокраски волокнистой соединительной ткани с использованием фосфорно-вольфрамовой и фосфорно-молибденовой кислот (метод Мэллори, метод Массона и др.). При этом коллагеновые волокна окрашиваются в синий цвет, ретикулярные (ретикулиновые) — в голубой, эластические — в красный.