Группы крови, резус принадлежность. Методы определения

Одно из различий между системами  резус и АВО, имеющее важное практическое значение, заключается в том, что  агглютинины системы АВО всегда содержатся в крови человека уже  после первых месяцев жизни, тогда  как Rh – агглютинины появляются только полсе сенсибилизации: контакта резус-отрицательного индивида с резус-антигенами.  Следовательно, при первом переливании резус-несовметимой крови явной реакции обычно не возникает. Реакции антиген-антитело появляются только при повторном переливании такой крови.

Другое  различие между двумя системами  состоит в том, что большинство  резус-агглютининов представляет собой  неполные антитела иммуноглобулинов класса G, размеры которых в отличие от размеров полных агглютининов системы АВО достаточно малы, чтобы они могли проникать через плацентарный барьер. [6]

           Резус-несовместимость и беременность. При беременности из крови резус-положительного плода  в кровь резус-отрицательной матери могут проникать небольшие количества эритроцитов. Это приводит к выработке агглютининов против Rh+ - эритроцитов. Обычно лишь во время родов в кровь матери попадает большое количество (10-15 мл) эритроцитов плода. Поскольку титр антител возрастает в крови матери относительно медленно (в течение нескольких месяцев), при первой беременности осложнений обычно не возникает. Однако при второй беременности резус-отрицательной женщины резус-положительным плодом титр антител у нее в крови может достигать столь высокого уровня, что в результате проникновения агглютининов через плаценту эритроциты плода начинают разрушаться. Это приводит к серьзным нарушениям жизнедеятельности плода и даже к внутриутробной смерти (эритробластоз плода). Образование антител в организме резус-отрицательной женщины  можно ограничить или полностью подавить путем так называемой анти-D-профилактики. Если непосредственно после родов (в том числе преждевременных) женщине ввести анти-D-глобулин, то резус-положительные эритроциты, проникшие в ее кровь, разрушатся и тем самым будет ликвидирован фактор, вызывающий выработку антител иммунной системой. Реакции антиген-антитело могут возникать  и при несовместимости матери и плода по другим групповым признакам (в частности, АВО), однако такие реакции обычно бывают слабо выраженными.[4]

 

 

 

2.3. Другие системы

Исследования иммуногематологов  позволили осуществить давнюю мечту  человечества — пересадку органов  и тканей. Первые пересадки органов  делались лишь с учетом групповой  принадлежности — подбирали донора, у которого была та же группа крови, что и у реципиента. Эффект отторжения пересаженной ткани показал, что этого недостаточно.

В 60-е гг. XX столетия французским  профессором Доссе была открыта  система лейкоцитов, получившая международное  название HL-А от первых букв латинских  слов: «гуман» (человек), «лейкоциты», «антиген» – антигены гистосовместимости, которые играют важную роль в трансплантационном иммунитете. Благодаря открытию Доссе стал возможен подбор наиболее оптимального донора при пересадке органов.

Система MN закодирована в двух генах, что дает три возможных генотипа (MM, MN и NN), которые соответствуют группам крови М, MN и N. Этой системе близкородственна система Ss. Имеется также система Р. В редких случаях названные группы крови оказываются несовместимы, что осложняет подбор крови для переливания. Прочие антигены групп крови (Kell, Duffy, Kidd, Lewis и Lutheran) названы по именам тех людей, у которых они были впервые обнаружены и описаны. Первые три из них могут вызывать осложнения и гемолитическую болезнь при переливании крови; для двух последних таких осложнений не описано. Известны еще некоторые редкие системы групп крови, важные с генетической точки зрения. Среди них можно назвать Diego – систему, практически не встречающуюся у жителей Европы и Западной Африки, но изредка выявляемую у лиц монголоидной расы, за исключением эскимосов.

Относительно недавно обнаружена система Xg, представляющая особый интерес, потому что кодирующий ее ген расположен в Х-хромосоме. Это первая из известных  систем групп крови, сцепленная с  полом. [7]

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3. Наследование  групп крови

3.1. Наследование групп крови системы АВО

Существуют законы наследования групповых  признаков крови. Основные правила  наследования заключаются в следующем .

У ребенка не могут появиться  групповые признаки А, В и резус, если они отсутствуют у родителей. Если родители (один или оба) имеют группу крови 0 (I), то их ребенок не может иметь группу АВ (IV). В браках, в которых родители (один или оба) относятся к группе крови АВ (IV), не может родиться ребенок с группой крови 0 (I).

Если у отца и у матери первая группа крови, то и у ребенка может  быть только первая группа. Если у отца и у матери вторая группа крови, то у ребенка будет первая или  вторая. Если же у отца и у матери третья группа крови, то у ребенка  может быть только первая или третья группа крови, но не вторая или четвертая.

Таблица 1. Наследование групп крови

Группы крови родителей	Группы крови, возможные у детей	Группы крови, невозможные у детей
0 х 0	0	А, В, АВ
0 х А	0, А	В, АВ
А х А	0, А	В, АВ
0 х В	0, В	А, АВ
В х В	0, В	А, АВ
А х В	0, А, В, АВ	-
0 х АВ	А, В	0, АВ
А х АВ	А, В, АВ	0
В х АВ	А, В, АВ	0
АВ х АВ	А, В, АВ	0

Исследование групповой принадлежности крови не позволяет категорически  утверждать, что этот ребенок появился на свет от этих родителей; возможно лишь следующее заключение: «Этот ребенок может (или не может) принадлежать этим родителям». В таком же духе экспертиза может судить и об отцовстве или материнстве в отношении данного ребенка. Так, у матери с группой крови АВ (IV) дети унаследуют либо А, либо В, но не могут иметь О (I) группу крови.

 

 

 

 

3.2.Наследование групп  крови системы  Rhesus

 Резус-система  определяется тремя сцепленными  генами (CDE); все эти гены локализованы в 1-й хромосоме. Наиболее сильным антигеном резус-системы является антиген RhD, который контролируется соответствующим геном D. При этом резус-положительная группа крови доминирует над резус-отрицательной.

Наследование  резус-фактора происходит сложным  образом, но, учитывая ведущую  роль гена  D, его можно представить как моногенное наследование с полным доминированием: при генотипе DD или Dd резус положительный (Rh+), а при генотипе dd – отрицательный (Rh–). Соответствие генотипов, антигенов, антител и групп крови можно отразить в виде таблицы:

  Таблица 3 .Наследование резус-фактора

Генотипы	Антигены	Нормальные  антитела	Иммунные антитела	Группы крови
DD,  Dd	есть	нет	нет	Rh+
dd	нет	нет	есть	Rh–

Переливание резус–положительной  крови человеку с резус-отрицательной  группой  крови приводит к развитию иммунной реакции на резус-антиген: синтезируются резус-антитела, то есть происходит иммунизация организма против резус-антигена. Этот процесс продолжается в течение 2…4 месяцев. Резус-антитела сохраняются в сыворотке длительное время. Если иммунизированному человеку перелить резус-положительную кровь, то резус-антитела разрушают резус-положительные эритроциты, что приводит к гемолитическому шоку, а нередко – и к смерти человека.

Большое значение резус-совместимость  имеет  при вынашивании плода. Если резус-отрицательная женщина (dd) вынашивает резус-положительный плод с генотипом Dd (аллель D приходит от резус-положительного отца DD или Dd), то происходит иммунизация организма матери резус-антигеном.

 Существуют  различные точки зрения на механизм иммунизации. Согласно одной из них, часть эритроцитов плода попадает в кровоток матери при родах. Однако имеются данные о возможности проникновения резус-антигенов через плаценту еще до родов; в то же время, в некоторых случаях иммунизации не происходит.

 Если  организм женщины оказался  иммунизированным резус-антигеном,  то при повторной  беременности резус-антитела через  плаценту попадают в кровоток плода. Если генотип второго ребенка  dd, то резус-антигены отсутствуют, и резус-конфликта не происходит. Но если генотип второго ребенка Dd, то резус-антитела матери разрушают резус-положительные эритроциты плода. Это приводит или к гибели плода, или к рождению неполноценного ребенка.

  Таким образом, браки ♀  Rh– × ♂ Rh+ (например, ♀ dd × ♂ Dd или ♀ dd × ♂ DD) оказываются неблагоприятными, т.к. в этом случае велика вероятность рождения неполноценного ребенка. Однако в каждом конкретном случае все может быть не так страшно.

  Во-первых, в браках ♀  dd × ♂ Dd (то есть при гетерозиготности отца) вероятность образования резус-отрицательного плода с генотипом dd составляет 50%. Тогда никакой иммунизации не происходит. Вполне возможно, что и последующие дети окажутся резус-отрицательными, и никакого резус-конфликта не возникнет.

 Во-вторых, даже если в браке  ♀ dd × ♂ Dd первый плод окажется резус-положительный (Dd), и произойдет иммунизация материнского организма, то последующие дети могут оказаться резус-отрицательными, и резус-антигены не окажут на их эритроциты вредного воздействия.[6]

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

4.Определение  групп крови и резус-фактора

Определение групповой принадлежности крови по системе АВО. [9]

1. Метод стандартных сывороток  – используются стандартные сыворотки первой, второй и третьей групп крови, которые содержат антитела соотвествующей группы; следовательно, в исследуемой крови определяем антигены.

Рис.1 Определение группы крови системы АВО.

Одну каплю крови смешивают  с сывороткой анти-В, вторую – с  анти-А, третью – с анти-А-анти-В. По реакциям агглютинации (скопления  эритроцитов, показанные ярко-красным  цветом) судят о групповой принадлежности крови.

2. Метод стандартных эритроцитов – используются стандартные эритроциты второй и третьей групп, которые содержат соответствующие антигены (А, В); следовательно, в исследуемой крови определяют антитела.
3. Метод цоликлонов – используются цоликлоны анти-А (альфа) и анти-В (бета), это моноклональные антитела, в крови определяем антигены.

Определение резус-принадлежности крови.

1. Метод антирезусных сывороток – используется антирезусная сыворотка, которую наслаивают по стенке пробирки, следом каплю крови, пробирку покачивают несколько минут, затем добавляют каплю физиологического раствора для исключения ложной агглютинации. Если агглютинация есть – резус положительный; при отсутствии агглютинации – резус отрицательный.

На рисунке ниже представлен  картина агглютинации. Здесь изображены капельки крови , к которым добавлена сыворотка, содержащая антитела к резус-белку. Синим обведены капли, в которых с кровью ничего не происходит. Если реакция при добавлении антител не идет, то, значит у данного человека резус-белок отсутствует. Красным обведены образцы крови, в которых происходит агглютинация. Буквами помечены капли крови, которые реакцию дают, но очень слабую. Такое встречается у приблизительно 1% людей, и это так и называемый слабый резус фенотип.

Рис.2 Метод антирезусных сывороток

2. Метод цоликлонов – цоликлон анти-D-супер [10]

Цоликло́н — это солевой раствор  моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов  человека. Моноклональные антитела для цоликлонов получают при помощи гибридом, или определенных штаммов бактерий. Бактерии для таких производств получают методами генной инженерии.

Название препаратов происходит от названия института, где изобрели и  изготовили эти растворы — Центральный Ордена Ленина Институт переливания крови в Москве, сейчас — Гематологический научный центр Росздрава.

Ход определения. На планшет индивидуальными пипетками наносятся цоликлоны Анти-D, Анти-С, Анти-с по одной большой капле (0,1мл). Рядом с каплями антител наносится по одной маленькой капле исследуемой крови (0,01 мл). Кровь смешивается с реагентом. Наблюдается ход реакции с цоликлонами визуально при легком покачивании планшета в течение  трех минут. Агглютинация эритроцитов с цоликлонами обычно наступает в первые 3-5 сек., но наблюдение следует вести 3 минуты ввиду более позднего появления агглютинации с эритроцитами, содержащими слабые разновидности резус-антигена. При использовании цоликлонов термостатировать не требуется,

Интерпретация результатов. Результат реакции в каждой капле может быть положительным или отрицательным. Положительный результат выражается в агглютинации (склеивании) эритроцитов. Агглютинаты видны невооруженным глазом в виде мелких красных агрегатов, быстро сливающихся в крупные хлопья. При отрицательной реакции капля остается равномерно окрашенной в красный цвет, агглютинаты в ней не обнаруживаются.