Т – лимфопоэз, структура антигенраспознающих рецепторов Т – лимфоцитов, эффекторные реакции Т – клеток

Более детально этапы фагоцитоза выглядят следующим образом:

1. Хемотаксис. Чужеродные клетки (опсонизированные или неопсонизированные) посылают в окружающую среду хемотаксические сигналы, в направлении которых начинает двигаться фагоцит. Ранее других клеток в очаг воспаления мигрируют нейтрофилы, а позже - макрофаги.

2. Адгезия фагоцитов к объекту. Обусловлена наличием на поверхности фагоцитов рецепторов для молекул, представленных на поверхности объекта (собственных или связавшихся с ним).  Акт адгезии включает две фазы: распознавание чужеродного (специфический процесс) и прикрепление, или собственно адгезию (неспецифический процесс). В случае, если отсутствует предварительное специфическое распознавание чужеродных клеток, адгезия фагоцитирующей клетки к объекту фагоцитоза происходит крайне медленно.

3. Активация мембраны. На этой стадии осуществляется подготовка объекта к погружению. Происходит активация протеинкиназы С, выход ионов кальция из внутриклеточных депо. Большое значение играют переходы золь-гель в системе клеточных коллоидов и актино-миозиновые перестройки.

4. Погружение. Происходит обволакивание объекта. В процессе фагоцитоза плазматическая мембрана макрофага при помощи образованных ею выступающих складок захватывает объект фагоцитоза и обволакивает его.

5. Образование фагосомы. Происходит замыкание мембраны, погружение объекта с частью мембраны фагоцита внутрь клетки. Образующаяся при этом небольшая вакуоль называется фагосомой.

6. Образование фаголизосомы. Слияние фагосомы с лизосомами, в результате чего образуются оптимальные условия для бактериолиза и расщепления убитой клетки.

 7. Киллинг и расщепление. В фагосоме захваченная чужеродная клетка гибнет. Для осуществления киллинга макрофаг продуцирует и секретирует в фагосому реакционноспособные производные кислорода. Основные вещества участвующие в бактериолизе: пероксид водорода, продукты азотного метаболизма, лизоцим и др. Процесс разрушения бактериальных клеток завершается благодаря активности протеаз, нуклеаз, липаз и других ферментов.

Переваривание захваченного и убитого материала - завершающий этап фагоцитоза. Для этого с фагосомой, содержащей объект фагоцитоза, объединяются лизосомы, которые содержат более 25 различных ферментов, в число которых входит большое количество гидролитических энзимов. В фагосоме происходит активация всех этих ферментов, так называемый метаболический взрыв, в результате которого фагоцитированный объект переваривается.

8. Выброс продуктов деградации.

Фагоцитоз может быть:

- завершённым (киллинг и переваривание прошло успешно);

- незавершённым (для ряда патогенов фагоцитоз является необходимой ступенью их жизненного цикла, например, у микобактерий и гонококков).

Изучение показателей фагоцитоза имеет значение в комплексном анализе и диагностике иммунодефицитных состояний: часто рецидивирующих гнойно-воспалительных процессах, длительно не заживающих ран, склонности к послеоперационным осложнениям.

 Для исследования фагоцитарной функции используют:

- подсчет абсолютного числа  фагоцитов (нейтрофилов и моноцитов);

- оценку интенсивности  поглощения микробов фагоцитами;

- определение способности  фагоцитирующих клеток переваривать  захваченные микробы.

Наиболее информативным для оценки активности фагоцитоза считают фагоцитарное число, количество активных фагоцитов и индекс завершённости фагоцитоза.

Наиболее распространенным методом количественного определения и характеристики морфологических дефектов нейтрофилов является лейкограмма и цитологические исследования с использованием световой и электронной микроскопии.

Для определения хемотаксической активности нейтрофилов применяют метод исследования миграции лейкоцитов с использованием камеры Бойдена. Метод основан на разделении микропористым фильтром в растворе двух реагирующих компонентов: нейтрофилов и хемотаксических агентов (например C5a), которые помещаются в нижнюю камеру и создают концентрационный градиент. Помещенные в верхнюю камеру нейтрофилы мигрируют вдоль градиента и собираются на нижней поверхности фильтра. После стандартной инкубации фильтры извлекают, окрашивают и подсчитывают количество клеток. Метод довольно прост и отличается весьма высокой воспроизводимостью. Этот же принцип лежит в основе метода клеточной миграции под агарозным гелем, который используется для определения хемотаксического индекса.

Фагоцитарное число - норма — 5-10 микробных частиц. Это среднее количество микробов, поглощённых одним нейтрофилом крови. Характеризует поглотительную способность нейтрофилов. Определяется путем подсчета количества поглощенных бактерий одной клеткой после инкубации клеток пациента со стандартными препаратами St.aureus или E.coli и окраски полученных мазков. Модификацией этого теста является метод определения бактерицидной активности, при котором отмытая суспензия клеток инкубируется с бактериальной суспензией, затем смесь наносится на поверхность кровяного агара и через определенное время подсчитывается количество выросших бактериальных колоний. Оба метода требуют стандартизации для использования в каждой конкретной лаборатории и сведений об антибиотикотерапии, которая может быть причиной недостоверных результатов или ошибок в их интерпретации. 

Фагоцитарная ёмкость крови - норма — 12,5-25х109 на 1 л крови. Это количество микробов, которое могут поглотить нейтрофилы 1 л крови.

Фагоцитарный показатель- норма 65-95%. Это относительное количество нейтрофилов (выраженное в процентах), участвующих в фагоцитозе.

Количество активных фагоцитов- норма — 1,6-5,0х109 в 1 л крови. Это абсолютное количество фагоцитирующих нейтрофилов в 1 л крови.

Индекс завершённости фагоцитоза- норма — более 1. Он отражает переваривающую способность фагоцитов.

Фагоцитарная активность нейтрофилов обычно повышается в начале развития воспалительного процесса. Её снижение ведёт к хронизации воспалительного процесса и поддержанию аутоиммунного процесса, так как при этом нарушается функция разрушения и выведения иммунных комплексов из организма.

Спонтанный тест с НСТ(нитросиний тетразолий)  - в норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет до 10%.Этот тест позволяет оценить состояние кислородзависимого механизма бактерицидности фагоцитов (гранулоцитов) крови in vitro. Он характеризует состояние и степень активации внутриклеточной НАДФ-Н-оксидазной антибактериальной системы. Феномен респираторного (или метаболического) взрыва связан со значительным увеличением кислорода, поглощаемого лейкоцитами при фагоцитозе, в результате чего происходит образование супероксидного радикала (Оз-) и перекиси водорода. Все эти соединения обладают микробоцидными свойствами, и их идентификация представляет собой важный этап в оценке функциональной активности фагоцитарных клеток.

 Показатели НСТ-теста повышаются  в начальный период острых  бактериальных инфекций, тогда как при подостром и хроническом течении инфекционного процесса они снижаются.

Снижение спонтанного теста с НСТ характерно для хронизации воспалительного процесса, врождённых дефектов фагоцитарной системы,  иммунодефицитов, злокачественных новообразований, тяжёлых ожогов, травм, недостаточности питания, лечения некоторыми лекарствкнными препаратами, воздействия ионизирующего излучения.

Повышение спонтанного теста с НСТ отмечают при антигенном раздражении вследствие острого бактериального воспаления, лейкоцитозе, усилении антите-лозависимой цитотоксичности фагоцитов, аутоаллергических заболеваниях, аллергии.

Активированный тест с НСТ используется для определения фагоцитарной метаболической (кислородо-зависимой) активности нейтрофилов. Тест включает в себя инкубацию нейтрофилов с НСТ in vitro, и по формированию нерастворимых окрашенных зерен формазана можно судить о восстановлении НСТ супероксидным радикалом, образующимся при активации фагоцитов. Отсутствие осадка свидетельствует о неспособности клеточной популяции фагоцитов к метаболизму.

 В норме у взрослых количество НСТ-положительных нейтрофилов составляет 40-80%. Снижение показателей активированного НСТ-теста нейтрофилов ниже 40% и моноцитов ниже 87% свидетельствует о недостаточности фагоцитоза.

4. Проведите  анализ результатов серологических  методов диагностики инфекционных  заболеваний животных на примере  работы ветеринарной лаборатории (районной, областной, межрайонной)

Районная ветеринарная лаборатория в федеральном государственном учреждении "Егорьевская районная ветеринарная лаборатория" в Московской области.

 Заведующий ветеринарной лабораторией Новиков О.П., ветеринарный врач серологического отдела Иванова Т.Н.

Деятельность лаборатории направлена на обеспечение профилактики и ликвидации болезней животных, на охрану населения от болезней общих для человека и животных, a также выпуск доброкачественной продукции и сырья животного происхождения.

Лаборатория проводит бактериологические, биохимические, серологические, паталогоанатомические, токсикологические, капроскопические и другие лабораторные методы исследования соответствующих материалов, поступающих из ветеринарных учреждений района или непосредственно из хозяйств.

Лаборатория проводит диагностику таких заболеваний как: сибирская язва, бешенство, эмфизематозный карбункул, злокачественный отек, некробактериоз, столбняк, туберкулез, паратуберкулез, ботулизм, бруцеллез, инфекционный эпидидимит, лептоспироз, рожа свиней, сап лошадей, листериоз, сальмонеллез, колибактериоз, колисептицемия, диплококковая инфекция, копытная гниль, респираторный микоплазмоз, лейкоз крупного рогатого скота, дерматомикозы, кандидамикозы, аспергиллез, актиномикоз, стахиоботриотоксикоз; паразитарные болезни – пироплазмидозы, анаплазмозы, кокцидиозы, трихомоноз, лейшманиоз собак, трипаносомоз, балантидиозы; гельминтозы- трематодозы, цестодозы, нематодозы.

В целях равномерной загрузки лабораторий массовые серологические, капроскопические, аллергические исследования проводятся лабораторией по соответствующему календарному плану, согласованному с главным ветеринарным врачом района.

Лаборатория  изучает в закрепленной зоне эпизоотическое и ветеринарно-санитарное состояния хозяйств, проводит испытания новых диагностических препаратов.

Лаборатория консультирует ветеринарные учреждения, ветеринарных специалистов и работников хозяйств по вопросам профилактики и ликвидации болезней животных.

При выявлении особо-опасных заболеваний лаборатория определяет характер, объем и порядок диагностических исследований, проводит их выявления в сжатые сроки, в случае необходимости направляет своих специалистов для уточнения диагноза на месте и выяснения степени распространения инфекции.

Таблица 1 - Отчет ветеринарной лаборатории (с декабря 2012 г. по ноябрь 2013 г.) по исследованиям на вирусные болезни