Фармакотехнологические исследования по разработке и изучению стабильности лекарственных форм с азитромицином

Из результатов исследования следует, что диаметр зон угнетения роста микроорганизмов увеличивается пропорционально содержанию антибиотика в суппозиториях, независимо от используемой основы. При этом оптимальной следует считать дозировку 200 мг, т.к. ее повышение до 300 мг не приводит к статистически достоверному увеличению зоны ингибирования роста тест-культур. Отмечено, что лучшее высвобождение, при любом содержании азитромицина, обеспечивают липофильные основы.

Выбор основы осуществляли также методом равновесного диализа через полупроницаемую мембрану (целлофановая пленка МСАТ-200, толщина 0,25 мм, размер пор 50 мкм). В качестве диализной среды (с учетом свойств растворимости азитромицина) использовали 0,05 М раствор калия фосфата двузамещенного в смеси вода – ацетонитрил (9:11). Азитромицин в диализате определяли методом спектрофотометрии в УФ-области. Результаты исследования, как среднее значение пяти параллельных опытов, представлены на рисунке 1. Они свидетельствуют, что наиболее полное высвобождение азитромицина обеспечивают суппозитории на основах бутирол и витепсол Н-15 – к 6 ч эксперимента в диализате его обнаружено 71,12 % и 60,18 % от содержания в навеске исследуемого образца, соответственно.

Рисунок 1 – Высвобождение азитромицина из суппозиториев на основах: бутирол (1), витепсол Н-15 (2), ГХМ-5 Т (3), ПЭО (4), желатино-глицериновой (5)

Результаты, полученные методом диализа in vitro, соотносятся с полученными ранее методом диффузии в агар: оптимальные показатели обеспечивают основы бутирол и витепсол Н-15, которые были использованы в дальнейших исследованиях.

С биофармацевтической точки зрения значительное влияние на технологические и фармакокинетические характеристики лекарственного препарата, содержащего суспендированное вещество, оказывает степень его дисперсности. Размеры частиц исходной (неизмельченной) субстанции азитромицина и измельченной в мельнице марки МЛ-1 проанализированы с использованием микроскопа Микмед-1 (вариант 2-20), камеры «Minton» MTV-62 W1P. Установлено, что исходная субстанция полидисперсна, в ней присутствуют частицы размером до 500 мкм. После измельчения получен однородный порошок с размером частиц, не превышающих 10 мкм. При этом основную фракцию составили частицы размером до 5 мкм (92 %).

Влияние степени дисперсности на высвобождение азитромицина из суппозиториев изучено методом диализа in vitro в течение 6 ч. Результаты свидетельствовали, что уменьшение размера частиц ведет к повышению скорости и полноты высвобождения антибиотика: из суппозиториев на основе бутирол его высвободилось 88,90 %, на основе витепсол Н-15 – 75,18 %. Таким образом, установлена необходимость проведения технологической стадии предварительного измельчения субстанции перед ее введением в основу.

Известно, что на биодоступность лекарственной субстанции влияет наличие в лекарственной ПАВ. В таблице 2 представлены результаты высвобождения азитромицина из суппозиториев на основах бутирол и витепсол Н-15 с различным качественным и количественным содержанием ПАВ, полученные методом равновесного диализа, проведенного в течение 2 ч.

Как следует из представленных данных, рациональным является сочетание бутирола с эмульгатором Т-2, взятого в концентрации 2 % и витепсола-Н 15 – с твином-80. Увеличение концентрации твина-80 от 1 % до 2 % практически не сказывается на профиле высвобождения азитромицина, поэтому в дальнейших исследованиях его использовали в 1 % концентрации.

Изучено влияние ПАВ на динамику высвобождения азитромицина методом диализа в течение 6 ч. Установлено, что эмульгатор Т-2 увеличивает полноту высвобождения азитромицина из основы бутирол с 89 % до 93 %, а твин-80 из витепсола – с 75 % до 85 %. Это свидетельствует о целесообразности их введения в состав суппозиторной массы в подобранных концентрациях.

Таблица 2 – Влияние ПАВ на высвобождение азитромицина из суппозиториев (` x ± Δ` x, n = 5, р < 0,05)

ПАВ	Время, ч	Содержание ПАВ, %
		основа - бутирол			основа - витепсол
		0,5	1	2	0,5	1	2
		Высвобождение азитромицина в диализат, %
эмульга- тор № 1	0,5	17,14±0,87	19,34±0,73	20,71±0,54	14,96±0,82	17,04±0,49	18,42±0,54
	1	28,53±1,13	30,93±0,57	32,28±0,50	23,03±0,69	24,78±0,70	27,73±0,84
	1,5	39,39±0,54	40,89±0,60	42,38±0,55	31,19±0,50	32,38±0,43	35,27±0,78
	2	47,62±0,74	49,39±0,50	52,12±1,22	39,24±0,76	41,47±0,58	42,92±0,57
эмульга- тор Т-2	0,5	17,08±1,14	20,74±1,20	23,48±0,90	16,65±0,31	17,04±0,33	18,92±0,72
	1	21,28±1,44	30,46±1,54	40,56±1,32	21,28±1,06	23,93±0,83	26,16±0,84
	1,5	31,08±1,08	41,98±1,62	51,48±1,69	30,35±1,38	33,92±0,50	35,43±0,56
	2	39,27±1,40	50,37±1,63	62,57±1,71	40,37±0,76	42,49±0,92	44,91±0,98
твин-80	0,5	15,54±0,68	17,21±0,60	20,14±1,14	19,15±0,40	20,26±0,33	20,68±0,46
	1	33,63±1,14	37,33±0,81	39,32±0,74	36,89±0,36	37,87±0,50	38,19±0,47
	1,5	42,61±1,30	45,82±1,26	49,46±1,14	40,04±0,98	42,71±0,73	43,07±0,60
	2	52,38±0,84	54,48±0,78	57,58±1,13	45,68±0,46	47,08±0,79	48,82±0,99

Методом диализа через полупроницаемую мембрану в течение 6 ч установлено, что введение консервантов не изменяет профиль высвобождения азитромицина. Не отмечено также статистически достоверного влияния консервантов на антимикробную активность экспериментальных препаратов, о чем свидетельствуют зоны угнетения роста тест-микроорганизмов при проведении исследований методом диффузии в агар.

Таким образом, на основании проведенных исследований разработаны составы и технологическая схема (рисунок 2) производства суппозиториев.

Состав 1

Азитромицина             0,2 г

(ФС 42-0213-07)

Твина-80                       0,015 г

(ФС 42-2540-88)

Нипагина                     0,0011 г

(ФС 42-1460-89)

Нипазола                      0,0004 г

(ТУ 64-19-83-91)

Витепсола Н-15            1,285 г

(ТУ 3-2004)

 

 

 

 

 

Состав 2

Азитромицина                0,2 г

(ФС 42-0213-07)

Нипагина                        0,0011 г

(ФС 42-1460-89)

Нипазола                         0,0004 г

(ТУ 64-19-83-91)

Парафина                       0,13 г

(ГОСТ 23683-89)

Эмульгатора Т-2            0,03 г

(ФС 42-2689-96)

Жира кондитерского      0,76 г

(ГОСТ 28414-89)

Масла какао                    0,38 г

(ГФ X, ст. 486)

 

ВР-1 Кт, Кх, Кб

Подготовка воды очищенной

Сточные воды в канализацию

ВР-2.1

Подготовка воздуха

ВР-2.2

Приготовление дезрастворов

ВР-2 Кт, Кб

Санитарная обработка производства

Сточные воды в канализацию

ВР-2.3

Подготовка помеще ний, оборудования и технологической тары

ВР-2.4

Подготовка технологической одежды

ВР-2.5

Подготовка персонала

ВР-3.1

Измельчение азитромицина

ВР-3 Кт

Подготовка сырья

Потери  механические, в т.ч.  в канализацию

ВР-3.2

Отвешивание азитромицина, основ, ПАВ и консервантов

ТП-4.1

Плавление витепсола или сплавление компонентов бутирола

ТП-4 Кт

Приготовление основы

Потери  механические, в т.ч. в канализацию

ТП-4.2

Фильтрация расплавленной основы

ТП-5.1

Получение суппозиторной массы (получение концентрата азитромицина, введение в основу, гомогенизация

ТП-5 Кт, Кх

Получение суппозиториев

Потери  механические, в т.ч. в  канализацию

ТП-5.2

Дозирование суппозиторной массы и формование суппозиториев

УМО-6.1

Фасовка суппозиториев в контурную ячейковую упаковку

УМО-6 Кт, Кх

Упаковка и маркировка

Потери  механические на утилизацию

УМО-6.2

Маркировка

на склад

 

Рисунок 2 – Технологическая схема производства суппозиториев

Примечание – ВР - стадии вспомогательных работ; ТП - стадии основного технологического процесса; УМО - стадии упаковки, маркировки; Кт, Кх, Кб - контроль технологический, контроль химический и контроль биологический.

 

 

 

                                                                     13

 

Глава 4 Разработка состава и технологии

вагинального геля с азитромицином

Обоснование концентрации азитромицина осуществляли по результатам изучения его антимикробной активности в составе геля одного из выбранных для исследования полимеров - натрий карбоксиметилцеллюлозы (Nа-КМЦ). С учетом нормативной документации и данных литературы по содержанию антибиотиков в мазях для вагинального и наружного применения (как правило до 1-2 %) интервал концентраций азитромицина, исследуемый в модельных образцах геля, составил от 0,25 % до 2 %.

Полученные данные эксперимента (рисунок 3) позволяют сделать вывод, что оптимальной концентрацией азитромицина в геле следует считать 1 %, поскольку при ее увеличение до 2 % изменение диаметра ингибирования роста тест-микроорганизмов статистически недостоверно.

Рисунок 3 – Антимикробная активность модельных гелей азитромицина

Исходя из анализа литературы, с целью выбора основы геля были использованы производные целлюлозы (метилцеллюлоза (МЦ), Nа-КМЦ) и полиэтиленоксиды (ПЭО) с различной молекулярной массой. В качестве пластификатора вводили глицерин в концентрации 5 % и 10 %. Из исследуемых образцов на основании визуального контроля, удовлетворительных консистентных и осмотических свойств, наиболее приемлемыми оказались глицерогели МЦ и Nа-КМЦ с содержанием полимера 4 % и глицерогель на основе ПЭО с молекулярной массой 400 и 1500 в соотношении 6 : 3,5. В указанные основы вводили азитромицин (1 %) и изучали методом диализа через мембрану профиль его высвобождения. Установлено, что большая интенсивность высвобождения характерна для состава, приготовленного на основе 4 % глицерогеля МЦ. Через 6 ч от начала эксперимента выход азитромицина в диализную среду составил 51,26 % от содержания в исследуемом образце.

Влияние гелеобразователя на высвобождение азитромицина также изучали с использованием диффузии в агар в отношении тест-микроорганизмов St. aureus АТСС 6538-Р, B. cereus АТСС 10702 и E. coli АТСС 25922. Максимальный диаметр задержки их роста отмечен вокруг образцов геля на основе МЦ. По результатам, полученным методами диализа через полупроницаемую мембрану и диффузии в агар, в качестве оптимальной основы для образования геля был выбран состав, содержащий 4 % МЦ и 10 % глицерина.

Для 4 % глицерогеля МЦ установлена выраженная осмотическая активность, которая была изучена in vitro, в сравнении с контролем – 10 % раствором натрия хлорида. За 4 ч эксперимента он абсорбировал около 30 % воды, против 10 % контроля.

Таким образом, глицерогель на 4 % полимере МЦ обеспечивает полноту высвобождения, пролонгированность действия лекарственного вещества и осмотическую активность.

При изготовлении гелей, учитывая свойства растворимости азитромицина, его вводили по типу суспензии, предварительно измельчив а мельнице марки МЛ-1. Для равномерного распределения частиц дисперсной фазы и предотвращения их седиментации в геле азитромицин измельчали совместно с твином-80 и натрия лаурилсульфатом, взятых в концентрациях 0,1 %; 0,25 % и 0,5 %. С целью выбора ПАВ и обоснования их концентрации изучали процесс высвобождения антибиотика методом диффузии в агаровый гель в отношении указанных выше тест-культур. Измельчение азитромицина с натрия лаурилсульфатом не привело к изменению зон ингибирования роста тест-культур. Увеличение антибактериальной активности отмечено при его диспергировании с твином-80 в концентрации 0,25 % и 0,5 %. Однако различия в показателях статистически недостоверны, в связи с чем, в качестве оптимальной выбрана 0,25 %.

Путем микроскопического анализа изучено влияние твина-80 на дисперсность частиц азитромицина в составе геля. Установлено, что присутствие ПАВ не оказывает существенного влияния на степень измельченности твердой фазы. Размеры частиц азитромицина не превышали 10 мкм, при этом фракция до 5 мкм составила 92 % при измельчении без ПАВ и 94 % при измельчении с твином-80. Однако, его добавление способствовало более равномерному распределению и отсутствию слипания диспергированных частиц.

Для исследования микробиологической чистоты экспериментальные образцы геля готовили в условиях асептики и хранили в холодильнике при температуре (5±3) °С. Исследования проводили в соответствии с общей фармакопейной статьей ГФ XII изд. «Микробиологическая чистота». Установлено, что суммарное число аэробных бактерий и грибов в 1 г геля превышает нормируемые показатели. В связи с чем сделан вывод о необходимости введения консервирующего агента, в качестве которого использовали 0,1 % смеси нипагина и нипазола, взятых в соотношении 3:1. По результатам исследований предложен состав и технологическая схема производства (рисунок 4) геля азитромицина.

Азитромицина (ФС 42-0213-07)  1,0 г

Твина-80 (ФС 42-2540-88)  0,25 г

Нипагина (ФС 42-1460-89)  0,025 г

Нипазола (ТУ 64-19-83-91)  0,075 г

Метилцеллюлозы (ТУ-64-11-129-92)  4,0 г

Глицерина (ФС 42-2202-99)  10,0 г