Качественные реакции на белки и аминокислоты

Оформление результатов  опыта

Результаты проведения опыта рекомендуется  представить в форме таблицы:

                                                                                                          Таблица 4

№ пробир- ки	Реактивы, мл					Реакция с йодом по истечении  времени, мин
	Крахмал	Амилаза	NaCl	CuSО4	вода	0	1	2	3	4
1 2 3	3 3 3	1 1 1	0,5 - -	- 0,5 -	- - 0,5

Опыт 5. Исследование специфичности  амилазы.

Специфичность ферментов проявляется  в том, что они катализируют преобразование только своего субстрата и не действуют  на другие вещества.

В две пробирки наливают по 1 мл раствора амилазы, добавляют в первую пробирку 3 мл раствора крахмала, а во вторую – 3 мл раствора сахарозы. Пробирки перемешивают и ставят на водяную баню на 15 минут. Наблюдения за ходом опыта ведут  по реакции растворов в пробирках  с йодом на пластинках. Записывают цвет раствора в пробирках  в течение  опыта. Делают выводы.

По окончании опыта с растворами в обеих пробирках проделывают  реакцию  Троммера. В пробирки добавляют по 1 мл 10% раствора гидроксида натрия, несколько капель 1% раствора медного купороса, перемешивают и нагревают до кипения. Выпадает желтый осадок гидроксида  меди (I) или красный осадок оксида меди (Ι) вследствие окисления глюкозы и восстановления гидроксида меди  (II). Наблюдают, в какой из пробирок проба Троммера будет отрицательной, а в какой положительной и делают необходимые выводы.   

Оформление результатов  опыта

Результаты проведения опыта рекомендуется представить  в форме таблицы:

                                                                                                          Таблица 5

№ пробы	Амилаза слюны, мл	Раствор крахмала, мл	Раствор сахарозы, мл	Проба Троммера (+ или ─)	Реакция с раствором йода (+ или ─)
1 2	1 1	3       ─	─ 3

 

Лабораторная работа  № 12

Определение амилолитической активности слюны

Реактивы и оборудование: раствор Люголя (I₂  в KI), 0,1%-ный раствор крахмала, раствор Фелинга, 1% раствор хлорида натрия, 1% раствор медного купороса, пипетки, стаканы, пробирки, штативы.

 

В шесть пронумерованных пробирок внести по 1 мл Н₂О. В первую пробирку добавить 1 мл разбавленной в 10 раз слюны. Содержимое перемешать и 1 мл полученной смеси перенести из первой пробирки во вторую, из второй в третью, из третьей в четвертую и т.д. Из последней пробирки 1мл вылить. Таким образом разведение фермента  в каждой последующей пробирки получилось в два раза меньше, чем в предыдущей. Затем во все пробирки добавить по 2 мл 0,1% крахмала. Содержимое каждой пробирки перемешать путем перевертывания пробирки 3-5 раз и инкубировать при 37⁰С в течение 30 минут. Затем охладить во льду и в каждую пробирку  внести по капле йода (Люголя). Перемешать.

Жидкость окрашивается в желтый, красный и синий цвет. Желтая окраска  свидетельствует о полном расщеплении  крахмала. Отмечают последнюю пробирку с раствором желтого цвета и рассчитать амилазную активность.

Пример  расчета:

Например, последняя пробирка с  желтой окраской – четвертая, в которой  слюна разведена в 160 раз. Тогда, 1/160 мл слюны расщепляют 2 мл 0,1% крахмала, а 1 мл слюны расщепляет х мл крахмала, откуда

             1 ´ 2          1 ´ 2 ´ 160

Х =  ---------  =  -------------- = 320

                    1/16                  1

Оформление результатов  опыта

Результаты проведения опыта рекомендуется представить  в форме таблицы:

                                                                                                          Таблица 1

№ пробирки	1	2	3	4	5	6
Разведение, раз	20	40	80	160	320	640
Окраска с J2 (+,-)

 

Рассчитать  амилазную активность слюны и  сделать вывод, учитывая, что амилазная активность слюны в норме– от 160 до 320 единиц

 

 

Приложение

нормативы  биохимических  показателей  крови

Показатели	Ед. изме-рения	Вид     животных
		КРС	Овцы	Свиньи	Лошади
Цельная  кровь
Гемоглобин	г/л	99-129	79-119	99-119	90-149
Глюкоза	мг%	40-60	40-60	60-100	55-95
	ммоль/л	2,2-3,3	2,2-3,3	3,3-5,6	3,1-5,3
Кетоновые тела	мг%	1,0-6,0	1,0-3,0	0,5-2,5	-
Плазма  крови
Натрий	мг%	320-340	320-340	320-340	310-350
	ммоль/л	139-148	139-148	139-148	135-143
Калий	мг%	16-19	16-19	16-19	19-22
	ммоль/л	4,1-4,86	4,1-4,86	4,1-4,86	4,86-5,89
Щелочной резерв	об%СО2	46-66	48-60	45-55	50-65
	ммоль/л	19-27	20-25	18,5-23	21-27
Сыворотка  крови
Фосфор неорганич.	мг%	4,5-6,0	4,5-6,0	4,0-6,0	4,2-5,5
	ммоль/л	1,45-1,94	1,45-1,84	1,29-1,94	1,35-1,78
Кальций общий	мг%	10-12,5	10-12,5	10-14	10-14
	ммоль/л	2,5-3,13	2,5-3,13	2,5-3,5	2,5-3,5
Общий белок	г/л	72-86	65-75	70-85	70-78
альбумины	%	38-50	40-55	35-45	35-45
α-глобулины	%	12-20	13-20	14-20	14-18
β-глобулины	%	10-16	7-11	16-21	20-26
γ-глобулины	%	25-40	20-46	17-26	18-24
Билирубин	мг%	0,01-0,3	0,01-0,3	0,06-0,3	0,8-1,6
	ммоль/л	0,2-5,1	0,2-5,1	1,4-5,1	13,7-27,4
Триглицериды	мг%	20-50	60-80	20-80	-
	ммоль/л	0,22-0,6	0,66-0,88	0,22-0,88	-
ПВК	мг%	0,8-1,7	0,6-1,7	0,6-1,3	-
	ммоль/л	114-193	114-193	68-148	-
Молочная кислота	мг%	9-13	9-11	9-11	5-13
	ммоль/л	0,99-1,43	0,99-1,21	0,99-1,21	0,56-1,44
Витамин С	мг%	0,6-1,5	0,4-0,8	0,2-1,2	0,2-1,5
Каротин
в пастбищ. период	мг%	0,9-2,8	-	-	-
в стойловый пер.	мг%	0,4-1,0	-	-	-
Витамин А
в пастбищный пер.	мкг%	40-150	-	-	-
в стойловый пер.	мкг%	24-80	-	-	-
Креатинин	мг%	0,45-0,65	0,6-1,1	0,7-1,9	0,9-1,8
	ммоль/л	39,6-57,2	53-97	62-167	79-158

 

 

Лабораторная  работа № 1

Качественные реакции на белки  и аминокислоты

 

Лабораторная работа № 2

Реакции осаждения белков

 

Лабораторная работа № 3

 Определение изоэлектрической  точки  казеина и желатина

 

Лабораторная работа № 4

Разделение аминокислот методом

распределительной хроматографии  на бумаге

 

Лабораторная работа № 5

Определение концентрации белка в  сыворотке крови рефрактометрическим  методом

 

Лабораторная работа № 6

Определение концентрации белка колориметрическим

методом по биуретовой реакции

 

Лабораторная работа № 7

Кислотный гидролиз нуклеопротеида

 

  Лабораторная работа № 8

Качественные реакции на витамины

 

  Лабораторная работа № 9

Количественное определение витаминов

 

Лабораторная  работа № 10

Качественные пробы на присутствие ферментов

 

Лабораторная работа  № 11

Изучение свойств фермента амилазы слюны

 

Лабораторная работа  № 12

Определение амилолитической активности слюны

 

Лабораторная  работа № 1

 

Качественные реакции на белки  и аминокислоты

 

Реактивы, оборудование: 10% и 20% растворы гидроксида натрия, 1% раствор медного купороса, 0,5% водный раствор нингидрина, 1% раствор нингидрина в 95% растворе ацетона, конц. азотная и серная  кислоты, реактив Миллона, реактив Фоля, 0,1% раствор фенола, ледяная уксусная кислота, 5% свежеприготовленный раствор нитропруссида натрия, 0,2% спиртовой раствор α-нафтола, раствор  гипобромита натрия, крист. мочевина, 40% раствор мочевины, 0,01% раствор аргинина, 0,01% раствор тирозина, 0,005% раствор триптофана, раствор глиоксиловой кислоты,  1% раствор яичного белка, 1% раствор желатина, 10% раствор углекислого натрия, 1% раствор сульфаниловой кислоты в 5% растворе соляной кислоты (1:3), 5% раствор нитрита натрия; штативы с пробирками, держатели, спиртовки, стеклянные трубочки, пипетки.

 

Лабораторная работа № 2

 

Реакции осаждения белков

 

Реактивы и оборудование: раствор яичного белка, кристаллический сульфат аммония, насыщенный раствор сульфата аммония, 1% и 10% растворы уксусной кислоты, 10% раствор гидроксида натрия, концентрированные растворы соляной, серной и азотной кислот, 5% раствор трихлоруксусной кислоты, 20% раствор сульфосалициловой кислоты, 1% раствор медного купороса, 1% раствор ацетата свинца, насыщенный водный раствор фенола, раствор формалина, этиловый спирт, спиртовки пробирки, воронки, бумажные фильтры.

 

Лабораторная работа № 3

 

 Определение изоэлектрической  точки  казеина и желатина

 

Реактивы и оборудование: 0,1 М,  0,2 М и 1 М растворы  уксусной кислоты, 0,4 % раствор казеина в 0,2 М растворе ацетата натрия, 0,1 М раствор ацетата натрия, 1% раствор желатина, 96% этанол или ацетон, штативы, пробирки, фотоэлектроколориметр, кюветы, пипетки на 5 и 10 мл.

 

Лабораторная работа № 4

 

Разделение аминокислот методом

распределительной хроматографии  на бумаге

 

Реактивы и оборудование: Бутанол, ледяная уксусная кислота,  стандартная смесь растворов аминокислот-свидетелей лизина, глицина, фенилаланина, 0,1 М растворы фенилаланина, глицина, лизина, 1% раствор нингидрина в ацетоне или в 96% этиловом спирте, хроматографические камеры, хроматографическая бумага, фильтровальная бумага, микропипетки, делительные воронки, колбы или стаканы на 50 мл, цилиндры мерные,  линейки, ножницы, простые карандаши, иголки швейные, нитки, пластилин, стеклянные пластинки, сушильный шкаф или электрические плитки, пульверизатор или чашки Петри для проявления хроматограмм, таблицы со значениями Rf.

 

Лабораторная работа № 5

 

Определение концентрации белка в  сыворотке крови рефрактометрическим  методом

 

Реактивы и оборудование: Сыворотка крови, спирт для промывки призмы; рефрактометр, пипетка.

 

Лабораторная работа № 6

 

Определение концентрации белка колориметрическим

методом по биуретовой реакции

 

Реактивы и оборудование: кристаллический яичный альбумин, куриные и перепелиные яйца, 0,2% раствор гидроксида натрия, биуретовый реактив (1,5 г СuSO₄· 5H₂O и 6 г сегнетовой соли NaKC₄H₄O₆ · 4H₂O растворяют в 300 мл воды, затем при помешивании добавляют 300 мл 10% раствора гидроксида натрия и 1 г йодида калия для предотвращения самопроизвольного восстановления, объем доводят водой до 1 л. Раствор не подлежит длительному хранению), штативы с пробирками, пипетки, мерные цилиндры, мерные колбы на 100 мл, фотоэлектроколориметр  КФК-2, воронки, фильтры бумажные

 

Выделение рибонуклеопротеинов  из дрожжей и их гидролиз

 

Реактивы и оборудование: дрожжи, эфир, 10%, 20% и 0,1н раствор гидроксида натрия, 3% раствор уксусной кислоты, 10% раствор серной кислоты, концентрированная серная кислота, 1%  и 5 % раствор медного купороса, спиртовой раствор α-нафтола,  2% раствор азотнокислого серебра,  концентрированный раствор аммиака, молибденовый реактив, 1% раствор дифениламина, песок, ступки, колбочки с обратным воздушным холодильником на 50 мл, воронки,   стеклянные палочки и трубочки, пипетки, стаканы, пробирки, штативы, плитки или песчаная баня, марля, центрифуга, бумажные фильтры, спиртовки, лакмусовая бумага.