Электронная микроскопия

 

Министерство образования  и науки, молодежи и спорта Украины

Одесский национальный политехнический  университет

Химико-технологический  факультет

Кафедра органических и фармацевтических технологий

 

 

 

РГР по курсу «Химическая  микробиология»

по теме: Электронная  микроскопия

 

 

Выполнила: Студентка группы ХФ-101

Голик Ирина Александровна

Руководитель: ст. преп., к.б.н. Декина С.С.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Одесса-2012

 

Содержание

1.Назначение данного метода  микроскопии, его плюсы при  использовании в микробиологических  исследованиях…………………………………………..3

2.Необходимое оборудование, материалы и реактивы………………………4

3. Принцип метода………………………………………………………………5

4.Состав электронного  микроскопа……………………………………………6

5.Бактерия Chlamydia trachomatis……………………………………………..7

6.Пример использования  данного метода микроскопии…………………….8

7. Изображение микроскопической  картины…………………………………9

8.Список использованной  литературы…………………………………………10

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

1.Назначение данного метода  микроскопии, его плюсы при  использовании в микробиологических  исследованиях

 

  Для изучения структуры  клеток на субклеточном и молекулярном  уровнях, а также для изучения вирусов используют электронную микроскопию. Ценность электронной микроскопии заключается в ее способности разрешать объекты, не разрешаемые оптическим микроскопом в видимом или ультрафиолетовом свете. Малая длина волны электронов, которая уменьшается в прямой зависимости от подаваемого ускоряющего напряжения, позволяет разрешать, т.е. различать, как отдельные объекты, отстоящие друг от друга всего на 2А (0,2нм или 0,0002 мкм) или даже меньше, в то время как предел разрешения световой оптики лежит вблизи 0,2 мкм (он зависит от длины волны используемого света).

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

2.Необходимое оборудование, материалы и реактивы

Электронный микроскоп, бактерия, вирусы и другие биологические объекты освобождены от среды, солей, тканей. Для этого препарат промывается в дистиллированной воде. Отмытые объекты наносят на очень тонкую пленку (заменяющую предметное стекло), изготовленную из какого-либо пластического материала, например, коллодия. Для приготовления пленки каплю 1,5%-ного раствора коллодия в амилацетате наносят на поверхность воды. После испарения раствор, геля образуется тонкая пленка толщиной около 0,0000001 см. Эту пленку переносят на решетку с очень мелкими ячейками и готовят на ней препарат бактерий (препарат не окрашивается). Затем препарат отмывают дистиллированной водой, подсушивают и закрепляют в держателе приемной камеры микроскопа. Через такую тонкую пленку лучи проходят не задерживаясь, падают на объективную линзу.

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

3. Принцип метода

     Принципиальная оптическая схема электронного микроскопа аналогична схеме светового, в котором все оптические элементы заменены соответствующими электрическими: источник света — источником электронов, стеклянные линзы — линзами электромагнитными. В электронных микроскопах просвечивающего типа различают три системы: электронно-оптическую, вакуумную, электропитания. Фотографирование изображений при всех видах исследований проводится на фотопластинки или фотопленку. Источником электронов является электронная пушка, состоящая из V-образного вольфрамового термокатода, который при нагревании до 2900 °С при подаче постоянного напряжения до 100кВ в результате термоэмиссии испускает свободные электроны, ускоряемые за тем электростатическим полем, создаваемым между фокусирующим электродом и анодом. Электронный пучок затем формируется с помощью конденсорных линз и направляется на исследуемый объект. Электроны, проходя сквозь объект, за счет его разной толщины и электроной плотности отклоняются под различными углами и попадают в объективную линзу, которая формирует первое полезное увеличение объекта. После объективной линзы электроны попадают в промежуточную линзу, которая предназначена для плавного изменения увеличения микроскопа и получения дифракции с участков исследуемого образца. Проекционная линза создает конечное увеличенное изображение объекта, которое направляется на флуоресцирующий экран. Благодаря взаимодействию быстрых электронов с люминофором экрана на нем возникает видимое изображение объекта. После наведения резкости сразу проводят фотографирование. Увеличение конечного изображения на экране определяется как произведение увеличений, даваемых объективной, промежуточной и проекционной линзами.

 

 

 

 

 

 

 

4.Состав электронного микроскопа  

ОБЫЧНЫЙ ПРОСВЕЧИВАЮЩИЙ ЭЛЕКТРОННЫЙ МИКРОСКОП (ОПЭМ). Электроны  ускоряются, а затем фокусируются магнитными линзами. Увеличенное изображение, создаваемое электронами, которые  проходят через диафрагму объектива, преобразуется люминесцентным экраном  в видимое или регистрируется на фотопластинке. В ОПЭМ можно получить увеличение до 1 млн. 1 - источник электронов; 2 - ускоряющая система; 3 - диафрагма; 4 -конденсорная линза; 5 - образец; 6 - объективная линза; 7 - диафрагма; 8 - проекционная линза; 9 - экран или пленка; 10 - увеличенное изображение.

 

 

http://dic.academic.ru

5.Бактерия Chlamydia trachomatis

 

Chlamydia trachomatis — вид мелких грамотрицательных) кокковидных бактерий, относящихся к порядку ChlamydiaEes, семейству ChLamydiaceae, роду Chlamydia. Различают два биовара С. trachomatis: биовар трахома и биовар лимфогранулема венерум (LGV). Chlamydia trachomatis является паразитом человека, вызывая: поражения глаз (трахому, конъюнктивит) — серовары А, В, Ва, О. урогениталъный хламидиоз, артрит, пневмонию новорожденных — серовары D-K; тропическую болезнь — венерическую лимфогранулему— серовары Ц,l_2, l_2a, L3. Основные пути передачи — половой, перинатальный, контактно-бытовой. Третий биовар С. trachomatis (биовар МоРп — mouse pneumonitis) — возбудитель заболеваний

грызунов семейства Muridae теперь рассматривается как новый

вид — Chlamydia muridarum.

 

 

 

6.Пример использования данного метода микроскопии 

Электронно-микроскопическое  выявление частиц  Chlamydia   trachomatis 

 

методом ультратонких срезов

Подготовку проб из патологического  материала проводят по

общепринятой методике. Для  этого кусочки ткани из очагов поражения

(фрагменты органов умерших  плодов и новорожденных, плаценту)

фиксируют 2,5% раствором глютарового альдегида в течение 4 ч, затем в

1% растворе осмиевого ангидрида в течение 1 ч. Далее образец

обезвоживают в спиртах  восходящей концентрации: 30% -- 30 мин 2 раза,

50% -- 15 мин 2 раза, 70% -- 15 мин  1 раз, 96% -- 15 мин 2 раза, 100% --

15 мин 2 раза и заливают  в аралдитовые смолы по общепринятой методике.

Ультратонкие срезы готовят  на ультратоме. Срезы окрашивают

1% водным раствором уранилацетатa и азотнокислым свинцом в течение

20 мин. Микроскопирование проводят с помощью электронного микроскоп при различных увеличениях х10000-х80000. При анализе ультратонких срезов выявляются внутрицитоплазматические репликативные комплексы, содержащие хламидийные тельца на различных стадиях развития (ретикулярные, промежуточные, элементарные тельца). Элементарные тельца представляют собой округлые электронно-плотные частицы диаметром 0,2-0,3 мкм. Ретикулярные тельца имеют ламмелярную структуру и диаметр до 1,0-1,2 мкм

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

7. Изображение микроскопической картины

 

 

www.consilium-medicum.com.

 

 

 

 

 

 

 

 

8.Список использованной литературы

1. Атлас по медицинской микробиологии, вирусологии и иммунологии: Учебное пособие для студентов медицинских вузов / Под ред. А. А. Воробьева, А. С. Быкова — М.: Медицинское информационное агентство, 2003. — 236 с: ил.
2. Медицинская микробиология, иммунология  вирусология. Учебник для мед.вузов / А. И. Коротяев С. А. Бабичев — Спб. : СпецЛит, 2008. — 4 издание 767 с.
3. Электронная микроскопия : учеб. пособие / А. И. Власов, К. А. Ел-

суков, И. А. Косолапов. –  М. : Изд-во МГТУ им. Н. Э. Баумана, 2011. –

168 с. : ил. (Библиотека «Наноинженерия» : в 17 кн. Кн. 11).