Ферменты генетической инженерии

Стерилизация газообразными веществами

Аппаратуру, имеющую зеркальное, оптическое и радиоэлектронное оборудование, а также изделия из термолабильных пластмасс, например центрифужные пробирки, стерилизуют газовым методом. Для газовой стерилизации применяются только те соединения, которые обладают спороцидными свойствами. Это оксид этилена, метилбромид, оксид пропилена, формальдегид, глю-таральдегид, бета-пропиолактон, озон и др. Особенно эффективна смесь оксида этилена и бромистого метила в массовом соотношении 1:1,44 (смесь «ОБ»).

Газовую стерилизацию проводят в специальных герметически закрывающихся аппаратах. Стерилизуемые объекты, помещаемые в камеру, упаковывают, как при стерилизации в автоклаве или сушильном шкафу. Для упаковки используют материалы, не портящиеся в газовой среде и пропускающие газ и влагу: оберточную бумагу, муслин, хлорвиниловые и нейлоновые пленки. Перед введением в камеру биоцида из нее как можно полнее удаляют воздух, чтобы обеспечить тесный контакт активно действующего вещества со стерилизуемым объектом. При стерилизации строга контролируют концентрацию газа, давление, влажность, температуру и длительность экспозиции. В большинстве случаев процесс проводят в сочетании с некоторым повышением температуры (до 45—70°). Режимы стерилизации разными газами неодинаковы. Они определяются прежде всего свойствами биоцида. Имеет значение и конструкция стерилизационного аппарата. Оптимальный режим стерилизации смесью «ОБ» при 50° в аппарате емкостью 100 л и более следующий: концентрация смеси 3,36 г/л (давление 1,2 ати), относительная влажность 80—100%, продолжительность 24 ч. По окончании стерилизации удаляют газы из камеры с помощью вакуумного насоса и на некоторое время камеру оставляют под вакуумом для десорбции газов из стерилизованных предметов. После этого камеру заполняют стерильным воздухом. Предметами, простерилизованными газами, рекомендуется пользоваться не ранее чем через 24 ч после стерилизации. Это необходимо для полного удаления из них газа. Целесообразно на этот период поместить их в вытяжной шкаф или оставить в хорошо проветриваемом помещении. Некоторые изделия из пластмасс требуют дополнительной аэрации до 9 суток. При проведении газовой стерилизации строго соблюдают правила работы с ядовитыми газообразными веществами.

Стерилизация облучением

Для стерилизации помещений, оборудования, некоторых медицинских принадлежностей, пищевых продуктов используют различные виды излучений: инфракрасное, ультрафиолетовое, рентгеновские лучи, aльфа-, ветта-, гамма- радиоактивных элементов. Чаще других в микробиологической практике используется ультрафиолетовое облучение. Мощность ультрафиолета измеряется в бактах. Доза УФ-излучения, губительная для различных видов микроорганизмов (кроме спор), составляет 5 мкб/см2.

Основные способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных материалов обобщены в таблице.

Следует отметить, что все большее распространение получают посуда и инструменты одноразового использования.

 

Способы стерилизации питательных сред, посуды и других лабораторных материалов

 

Стерилизуемый материал	Метод стерилизации	Режим стерилизации	Примечание
1	2	3	4
Питательные   среды   с почвенной вытяжкой; картофельные и неко торые другие натуральные среды	Автоклавирование	1,5—2 атм, 30 мин	в колбах, пробирках, бутылях и т д, закрытых ватными пробками
Жидкие   и агаризованные среды не содержащие Сахаров и дру гих   веществ,     разлагающнхс при 120°	Автоклавирование	1 атм, 20 мин	то же
Жидкие   и агаризованные среды с сахарами и другими соединениями,   не    выдерживающим нагревания при 120 °С	Автоклавирование	0,5 атм, 15—30 мин	то же
Среды или компоненты среды, не выдерживающие нагревания выше 100°	Дробная стерилизация	текучий пар, 3 раза по 30—40 мин через сутки	то же
Среды или компоненты   сред, не выдерживающие      нагревания, например, белки, некоторые витамины и аминокислоты	Фильтрование  через бактериальные фильтры	-	-
Вазелиновое масло, глицерин, тальк	горячим воздухом	160°, 2 ч или 170°, 1 ч	слой вещества в сосуде не должен превышать 1,5 см
Чашки Петри, пипетки,   шпатели	горячим воздухом	160-170е, 2 ч	завернуты в бумагу (отверстия пипетки закрыты ватными тампонами)
Колбы, пробирки, химические стаканы,     флаконы,    стеклянные центрифужные пробирки, трубки Бурри	горячим воздухом	160—180°, 2 ч	закрыты ватными пробками
Шприцы	Горячим воздухом автоклавирование	160°, 1 ч 160°, 75 мин 1 атм, 15—20 мин	разобраны и завернуты в бумагу или ткань в собранном виде, в пробирке,  закрытой ватной пробкой разобраны и завернуты
Мембранные фильтры	Автоклавирование кипячение	1 атм, 15 мин 30 мин	в сосуде с дистиллированной  водой то же
Фильтры Зейтца	Автоклавирование горячим воздухом	1—1,5 атм, 20—30 мин 160°, 1 ч	цилиндр держателя закрыт ватной пробкой, в отводной трубке ватный тампон. Верхняя часть завернута в бумагу
Свечи Шамберлана и Беркефельда	Автоклавирование горячим воздухом	0,5—1 атм, 15 мин 160—170°, 2 ч	можно вместе с держателем закрыты ватными пробками, завернуты в бумагу и т. д., не должны быть соединены с новыми деталями
Стеклянные фильтры с держателем или отдельно	Автоклавирование	1 ати, 30 мин	закрыты ватными пробками, завернуты в пергамент и алюминиевую фольгу
Стеклянные фильтры без резиновых пробок	Горячим воздухом	1 атм, 20—30 мин	завернуты в бумагу
Центрифужные пробирки, изготовленные из термолабильных пластмасс	Газовая  стерилизация Ультрафиолетовыми лучами	время экспозиции устанавливают экспериментально	пробирки после облучения хранят в стерильной посуде

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

Термины

Бактериофаги (фаги) – вирусы, инфицирующие бактерии.

Библиотека генома – набор клонированных фрагментов ДНК, содержащий весь геном.

Брешь (пробел) в ДНК – отсутствие одного или нескольких нуклеотидов в цепи ДНК.

Гаплоид – ядро, клетка, организм, характеризующиеся одинарным набором хромосом, представляющим половину полного набора, свойственного данному виду организмов (символ n).

 

Ген – единичная структура генетической информации, участок хромосомы (молекулы ДНК), кодирующий структуру одной или нескольких полипептидных цепей, или молекул РНК, или определенную регуляторную функцию.

Генная инженерия – совокупность приемов, методов и технологий, в том числе технологий получения рекомбинантных рибонуклеиновых и дезоксирибонуклеиновых кислот, по выделению генов из организма, осуществлению манипуляций с ними и введению их в другие организмы.

Диплоид  - ядро, клетка, организм, характеризующиеся двойным набором гомологичных хромосом, представленных числом, характерным для данного вида (символ 2n).

ДНК – молекула дезоксирибонуклеиновой кислоты, состоящей из нуклеотидов (аденин, гуанин, цитозин, тимин), дезоксирибозы и остатков фосфорной кислоты.

Комплементарная цепь – одна из цепей ДНК, используемая в качестве матрицы для синтеза РНК и соответствующая ей по взаимодействию пар нуклеотидов.

Лигирование – образование фосфодиэфирной связи между двумя основаниями одной цепи ДНК, разделенным разрывом. Этот термин употребляют также в случае соединения тупых концов и при образовании связи в РНК.

Липкий конец – свободный одноцепочечный конец двуцепочечной ДНК,комплементарной одноцепочечному концу, принадлежащему этой же или другой молекуле ДНК.

Промотор – участок гена, ответственный за начало его транскрипции.

РНК – молекула рибонуклеиновой кислоты, в состав которой входят нуклеотиды (аденин, гуанин, цитозин, урацил), рибоза и остатки фосфорной кислоты.

Хромосомы  - генетические структурные образования ядра клетки, состоящие  из ДНК и белков. В хромосомах заключена наследственная информация организма.

АТТ – Сайты – участки фаговой и бактериальной хромосом, рекомбинация между которыми приводит к интеграции или исключению фага.

СААТ – участок консервативной последовательности, расположенный примерно на расстоянии 75 пар оснований перед стартовой точкой в транскрипционных единицах эукариот.

G-Белки – регуляторные белки, активирующие фермент, синтезирующий вторичный посредник.

 

 

 

 

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1.  В.С. Шевелуха, Е.А. Калашникова, Е.С. Веронин «СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННАЯ  БИОТЕХНОЛОГИЯ» - М.: высш. Шк., 2003 год.